خلاصه: فاكتور رشد فيبروبلاستي نوع يك FGF1 يك پلي پپتيد تك رشته اي متشكل از ۱۴۰ اسيد آمينه و فاقد باند دي سولفيدي مي باشد. وزن مولكولي آن ۱۶ كيلودالتون است. FGF1 باعث رشد و تمايز انواع سلولها مي شود،همچنين داراي فعاليت ميتوژنيك در بسياري از رده هاي سلولي و همچنين نقش آنژيوژنز و ترميم زخم دارد. همچنين نشان داده شده كه FGF1 داراي نقش حياتي در مهندسي بافت ،ايسكمي قلبي و بازسازي عصبي دارد. فاكتور رشد فيبروبلاستي( FGF1) يك نقش ضروري در روند بهبود زخم با تحريك تكثير فيبروبلاست و سلول هاي آندوتليال ايفا مي‌كند.به دليل اين گونه فعاليت هاي بيولوژيك، بايستي در صنعت داروسازي مورد توجه ويژه اي قرار بگيرد. تاكنون سيستم هاي بياني مختلفي براي بيان FGF1 استفاده شده اند كه شامل اشريشيا كلي، مخمرها، حشرات و موش مي باشند. در اين ميان اشريشياكلي به دليل مزايايي مانند سادگي كار كردن با آن، كشت آسان، و بازده بالا ، پر كاربردترين ميزبان بوده است. در اين تحقيق با استفاده از سيستم بياني pET24a-FGF-1 توليد پروتئين به صورت محلول صورت گرفت. بدين منظور ژن FGF-I كلون شده در وكتور pET24a درسه سويه¬ي باكتري اشريشياكلي از جمله OrigamiB (DE3) BL21(DE3) و Shuffle T7 ترانسفورم شد. بيان پروتئين نوتركيب پس از القا توسط IPTG در ژل الكتروفورز بررسي و توسط تكنيك وسترن بلاتينگ تاييد گرديد. توليد و بهينه سازي شرايط بيان پروتئين FGF-I با استفاده از سويه¬ي Shuffle T7 صورت گرفت. به منظور بهينه سازي شرايط توليد در مرحله اول، سه فاكتور دما (16, 22, 37 oC)، مقدار القاگر (0.2, 0.4,0.8,0.08mM) و نوع محيط كشت (LB, SOC) در نظر گرفته شد. نتايج حاصل از بهينه سازي داده¬ها نشان داد كه بيشترين مقدار توليد پروتئين FGF-I در دماي C°16 و در محيط كشت SOCاست و مقدار القاگر 0.2 mM صورت ميگيرد. در شرايط بهينه 1500 mg/l پروتئين نوتركيب با ميزان بيان 69.90% پروتئين كل و 12g/lوزن خشك نهايي توده سلولي بدست آمد. اين مقدار پروتئين يكي از بالاترين مقادير گزارش شده در اشريشيا كلي است. كلمات كليدي: اشريشياكلي، فاكتور رشد فيبروبلاستي نوع يك، پروتئين نوتركيب، بهينه سازي توليد، شافل

اختراع حاضر، مربوط به پروتئين L اصلاح شده با ظرفيت اتصال پوياي بهينه به قطعات آنتي بادي حاوي زنجيره سبك كاپا مي باشد و همچنين اتصال اين پروتئين اصلاح شده به عنوان ليگاند به يك بستر پلي مري كه در كروماتوگرافي تمايلي به منظور تخليص قطعات آنتي بادي حاوي زنجيره سبك كاپا از مخلوط پروتئين¬هاي سلول ميزبان استفاده مي¬شود. با توجه به توليد قطعات آنتي بادي دارويي در سلول¬هاي زيستي، به عنوان ابزاري كارآمد براي تخليص اين قطعات آنتي بادي از مخلوط پروتئين-هاي سلول ميزبان استفاده خواهد شد.

اين اختراع در حوزه بيوتكنولوژي قرار داشته و مربوط به توليد يك پپتيبادي براي درمان سرطان هاي داراي بيش بيان گيرنده فاكتورهاي رشد اپيدرمي (EGFR) مي باشد. EGFR در بسياري از تومورها افزايش بيان دارد. درمان هاي موجود از جمله آنتي بادي هاي مونوكلونال و مهاركننده‌هاي مولكولي كوچك داراي معايبي هستند كه نياز به توسعه درمان هاي جايگزين را نشان داده است. مشخص شده كه پپتيدها گزينه مناسبي جهت هدفگيري سلول‌هاي سرطاني هستند. در اين اختراع از اتصال پپتيد GE11 به Fc آنتي بادي با لينكرهاي پلي گلايسين استفاده شده و يك مولكول پپتيبادي كه EGFR را هدف مي‌گيرد ساخته شده است. نتايج نشان داده كه پپتيبادي داراي اثر مهاري بالايي بر روي رده هاي سرطاني داراي بيش بيان EGFR بوده و اين مهار را از طريق مكانيسم‌هاي متعددي مانند آپوپتوز و توقف چرخه سلولي اعمال مي‌كند. روش ارائه شده ابزار اميدواركننده‌اي در درمان تومورهاي داراي بيش بيان اين گيرنده مي‌باشد.